摘  要    通过对三种不同类型的大孔吸附树脂吸附洗脱特性参数比上柱量（Saturation ratio）、比吸附量（Absorbtion ratio）和比洗脱量（Eluation ratio）的比较研究确定大孔树脂分离制备三子咳喘胶囊浸膏洗脱条件宜采用AB-8型大孔树脂和70%浓度乙醇作为洗脱溶剂。随后对影响吸附分离的主要因素如上柱药液浓度、上柱药液量、上柱药液温度进行正交试验筛选，结合浸膏得率和芥子碱硫氰酸盐含量两个指标进行正交评价，得出分离纯化的优选条件。

Abstract: At first,comparision the characteristic arguments of macroporous resin,such as Saturation ratio ,Absorbtion ratio, Eluation ratio. The macroporous resin labeled AB-8 and 70% alcohol were selected for the isolating&purifying the cough and pant capsule of “Sanzi ” extraction ;Then, the extraction rate and the determination of Sinapin thiocyanate of the content in the cough and pant capsule of “Sanzi ”with the HPLC method were used as the optimized indexes,by orthogonal design optimized  the isolating&purifying extraction conditions,such as the drug liquid concentration for a column,the quantity of the drug liquid , the temperature of the drug liquid, that influence the absorption and  isolation of macropous resin precipitately process . Final the optimal isolating&purifying extraction conditions were obtained.

关键词         大孔吸附树脂     分离精制     总生物碱     三子咳喘胶囊

Keywords    macroporous resin   isolating&purifying  the total alkaloid

 the cough and pant capsule of “Sanzi ”

中图分类号：R932                文献标识码：A         文章编号：

﹡作者简介：张新勇（1970~）男，江苏南京人，副研究员；主要从事天然药物化学成分研究以及中药新药的研制和开发。联系电话：025-83650586；EM:zhangxinyong555@163.com。

古方三子养亲汤，由白芥子、紫苏子和莱菔子三味中药组成，治疗支气管炎的经典方剂，经化学成分分析其主要含有生物碱类成分，药理实验表明为该方剂发挥镇咳、祛痰和平喘作用的主要有效成分。由于中药成分复杂，特别是中药中往往糖类成分较多，影响制剂的质量，所以为了进一步提高制剂的质量和稳定性，我们采用大孔吸附树脂吸附柱方法洗脱去糖类等引湿性成分，富集其中的有效成

分。根据国家医药监督管理局关于大孔吸附树脂在医药产品中的应用的有关技术要求对大孔吸附树脂类型进行了优选，参照侯世祥和田恒康教授等人^[1，2]关于大孔吸附树脂吸附洗脱特性参数：比上柱量（Saturation ratio）、比吸附量（Absorbtion ratio）和比洗脱量（Eluation ratio）对天津浩聚树脂生产的D-101型AB-8型和NKA-9型三种类型和吸附特性的吸附树脂及洗脱溶剂进行筛选，最后确定采用AB-8型大孔树脂和70%浓度乙醇作为洗脱溶剂。随后对影响吸附分离的主要因素如上柱药液浓度、上柱药液量、上柱药液温度进行正交试验筛选，结合浸膏得率和芥子碱硫氰酸盐含量两个指标进行评价，得出分离纯化的优选条件。

1         试剂、药材及仪器

1．1  试剂

大孔树脂D-101型、AB-8型、NKA-9型（天津浩聚树脂科技有限公司）磷酸二氢钾、甲醇为分析纯，乙腈为色谱纯（进口），蒸馏水（自制），对照品芥子碱硫氰酸盐自己分离并鉴定结构（纯度为98%以上）。

1．2  药材

白芥子、莱菔子、紫苏子均购于南京市药材公司。并经中国药科大学药用植物教研室秦民坚教授进行品种鉴定，白芥子药材为十字花科植物白芥Sinapis alba L.的干燥成熟种子，莱菔子药材为十字花科植物萝卜Raphanus sativus L.的干燥成熟种子，紫苏子药材为唇形科植物紫苏Perilla frutescens(L.)Britt.的干燥成熟果实。

1．3  仪器

调温电热器（江苏通州市申通电热器厂），RE52-99旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)，SHZ-D(III)循环水式真空泵（河南巩义市英峪予华仪器厂），LD4-2A型医用离心机（北京医用离心机厂），CQ-50超声波清洗器（上海超声仪器厂），LC-6A型高效液相色谱仪（岛津），HP3395A记录仪（惠普），色谱柱Alltima phenyl 5u，250×4.6mm。

2  大孔吸附树脂类型和洗脱溶剂的筛选

2．1吸附洗脱特性参数

1、比上柱量（S,saturation ratio）: 达吸附终点时，单位质量干树脂吸附夹带成分的总和，S=(M_上—M_残)/M,表示树脂吸附、承载的总体能力，S越大，承载能力越强，是确定树脂用量的关键参数。

2、比吸附量（A,absorbtion ratio）: 单位质量干树脂吸附成分的总和A=(M_上—M_残—M_{水 洗})/M,表示树脂真实吸附能力，A越大吸附能力越强，是选择树脂种类与评价树脂再生效果的重要参数。

3、比洗脱量（E,eluation ratio）: 吸附饱和后，用一定量溶剂洗脱至终点，单位质量干树脂洗脱成分的质量，E=M_洗脱/M,表示树脂的解吸附能力与洗脱溶剂的洗脱能力，E越大表示洗脱溶剂的洗脱能力与树脂的解吸附能力越强，是选择洗脱溶剂的重要参数。

其中M为干树脂质量，即为市售树脂干燥至恒重测得的质量。M_上是上柱液中指标成分的质量，为上柱体积与指标成分浓度的乘积；或以上柱液相当与药材质量表示，则为上柱液的体积与单位体积浸出液相当与药材质量的乘积。M_残是过柱流出液中指标成分的质量，为流出液体积与其指标成分浓度的乘积。M_水洗上柱毕，最初用水洗脱下来的指标成分的质量，为水洗液体积与其指标成分浓度的乘积。M_洗脱为用洗脱溶剂洗脱出的指标成分的质量，由洗脱液体积与其中指标成分浓度计算而得。

2．2 试验方法与结果

2.2.1供试样品的制备

称取三子养亲汤药材（炒）紫苏子、（炒）白芥子、（炒）莱菔子各等份适量，混匀，击碎，置于提取容器中，以等量水搅拌均匀，放置浸泡两个小时后，再加三倍等量水加热煮沸，保持沸腾煎煮一小时后，停止加热，放置冷却至室温，绸布过滤得滤液，药渣再加入三倍量水，煎煮提取两次，每次一小时，过滤，合并三次滤液，离心取上清液，得三子汤提取液；提取液恒温水浴上减压浓缩至生药量与药液体积比为2:1（W/V）浓度，离心去除沉淀，在上清液中加入95%乙醇进行醇沉，使药液中乙醇浓度达70%，离心去除沉淀，取上清液，静置分取下层脂肪油后，减压回收乙醇至无乙醇为止，再在恒温水浴上减压浓缩使药液浓度达到适宜的浓度，将此溶液作为上柱药液。

取天津浩聚树脂科技有限公司生产的D-101型、AB-8型和NKA-9型三种不同类型和吸附特性的树脂柱，用上述处理好的三子药液上柱、水洗，再用不同浓度的乙醇梯度洗脱，分段收集过柱残液与水洗液，观察柱上树脂和流出液的颜色变化，用碘化铋钾试液判定吸附、洗脱终点，分别测定上柱液、过柱残液、水洗液、乙醇洗脱液中芥子碱的含量，并计算有关的特性参数，结果见表1。

            表1      大孔吸附树脂类型和洗脱溶剂的筛选结果

2.2.2 AB-8型大孔吸附树脂对三子提取液吸附饱和的预试验

取处理好的AB-8型大孔树脂100g，分别上相当于50g、100g、150g、200g、250g三子药材的药液（制备方法见供试样品的制备），接收流出液，用TLC法检测流出液中是否有芥子碱，依此来判断AB-8型树脂是否吸附饱和，每100g AB-8型树脂可饱和吸附相当重量（g）三子汤处方药材的量的范围为 200g～250g。                           

2.2.3三子咳喘胶囊浸膏吸附分离工艺条件的正交试验优选与结果讨论

        在选定大孔吸附树脂类型与洗脱溶剂的基础上，影响吸附分离纯化的主要因素有上柱药液浓度、上柱药液温度、上柱药液量，故选3个因素，每个因素选3个水平进行正交试验，以优选出最佳吸附分离工艺，因素水平安排见表 2。

                        表2      因素与水平表

表3    AB-8型大孔树脂对三子胶囊药液吸附分离正交试验设计表及结果统计

通过以上表3对浸膏得率、浸膏中指标性成分芥子碱含量以及其综合评分的统计结果，我们对它们分别进行了方差分析，结果如表4，5，6。

表4         得率方差分析表

表5         含量方差分析表

表6          综合评分方差分析表

3 结果分析与讨论

综合以上试验结果的计算、统计和方差分析可以得出以下结论。

3.1 各因素各水平对浸膏得率、浸膏中指标性成分芥子碱含量及其综合评分的影响大小不一样。

（1）从对浸膏得率的影响来看，A因素的三个水平的平均得率变化最大，即其极差R值最大，为0.63，是影响浸膏得率的主要因素，其次是C﹑B，所以因素的主次顺序为A C B，即树脂用量、药液浓度、药液温度。

（2）从对浸膏中指标性成分芥子碱含量的影响来看，C因素的三个水平的平均得变化最大，即其极差R值最大，为2.414，是影响芥子碱含量的主要因素，其次是A、B，所以因素的主次顺序为C A B，即药液浓度、树脂用量、药液温度。

（3）从对浸膏得率和含量的综合评分的影响来看，C因素的三个水平的平均得率变化最大，即其极差R值最大，为3.820，是影响其综合评分的主要因素，其次是A、B，所以因素的主次顺序为C A B，即药液浓度、树脂用量、药液温度。

3.2  从浸膏得率的方差分析结果可以看出A（树脂用量）、C（药液浓度）两因素具有显著差异，P值均为P<0.05，为影响浸膏得率的主要因素；从对浸膏中指标性成分芥子碱含量的方差分析结果可以看出C（药液浓度）﹑A（树脂用量）两因素具有显著差异，P<0.05，为影响芥子碱含量的主要因素；从浸膏得率和浸膏中芥子碱含量的综合评分的方差分析结果可以看出，C（药液浓度）和A（树脂用量）两因素具有显著差异， P<0.05，为影响其综合评分值的主要因素，故采用其最好水平C₂、A₂,即采用药液浓度浓缩至2：1浓度和上柱药液量为生药量与树脂量比为1.5：1两个条件。

 从上结果统计分析可以看出，B因素（即药液温度）对浸膏得率、浸膏中指标性成分

芥子碱含量及其综合评分的影响较小，方差分析P>0.05，无显著差异，为次要因素。所以从缩短生产周期、节约能耗、降低生产成本等实际情况考虑采用条件B₁，即药液温度为20℃。

4  结论

综上所述，在对大孔吸附树脂吸附洗脱特性参数：比上柱量（Saturation ratio）、比吸附量（Absorbtion ratio）和比洗脱量（Eluation ratio）的研究确定采用AB-8型大孔树脂和70%浓度乙醇作为洗脱溶剂的试验基础上，再考察影响吸附分离的因素，由正交试验确定最佳工艺为A₂ B₁ C₂，即树脂用量为与生药量比为1：1.5，药液温度为20℃，上柱药液浓度浓缩至2：1浓度。